产品简介:
DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。
DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
特点:不含RNase(RNase free),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片断文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
来源:从牛胰腺纯化得到。
分子量:约32kDa(单体)。
活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2。
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。