产品简介:
上海华潍生产的基因定点突变试剂盒(Site-directed Gene Mutagenesis Kit)可以用于点突变,多个邻近密码子的突变,单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。
本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成,和基于Dpn I的模板质粒的消化,转化培养以及后续的酶切或测序鉴定,即可得到预期的突变质粒。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。
使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物,在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板,用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒,但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌,在细菌中会被甲基化修饰,而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理,可以消化掉待突变的质粒模板,而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后,质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复,得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌,可用于感受态细菌的制备。
本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养。
需自行设计和合成用于基因定点突变的引物。需自备用于细菌转化的试剂。
使用本试剂盒前请先阅读后面的常见问题。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。