产品简介:
pCMV-C-HA是上海华潍自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端与HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-HA质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
multiple cloning site 680-740
c-HA tag 741-767
T7 promoter and T7 primer binding site 820–841
SV40 polyA signal 853–1236
f1 origin of ss-DNA replication 1374–1678
bla promoter 1703–1827
SV40 promoter 1847–2185
neomycin/kanamycin resistance ORF 2220–3011
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3012–3470
pUC origin 3599–4266
pCMV-C-HA的多克隆位点的详细图谱如下:
XmaI PstI
SacI Small BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
HA
EcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI Y P Y D
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA TACCCATACG
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT ATGGGTATGC
tag
V P D Y A ApaII
751 ATGTTCCAGA TTACGCTTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC
TACAAGGTCT AATGCGAATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG
pCMV-C-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA)包括:
Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I Bsg I
BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I BstE II
Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I Nru I
PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I Sca I
Spe I Spl I
pCMV-C-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241 |
Pvu I CG,AT`CG 854 |
pCMV-C-HA质粒中对于插入片断进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620–639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(820-841): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-HA的全序列信息: PHWE4416 pCMV-C-HA-seq.txt