产品简介:
pCMV-N-His是上海华潍自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-His质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
His tag 679–696
multiple cloning site 699–772
T7 promoter and T7 primer binding site 815–836
SV40 polyA signal 847–1230
f1 origin of ss-DNA replication 1368–1674
bla promoter 1699–1823
SV40 promoter 1843–2181
neomycin/kanamycin resistance ORF 2216–3007
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3008–3466
pUC origin 3595–4262
pCMV-N-His的多克隆位点的详细图谱如下:
His tag XmaI
SacI M H H H H H H SmaI
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGCA TCATCACCAT CACCATAGCC
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACGT AGTAGTGGTA GTGGTATCGG
PstI
BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI
701 CGGGCGGATC CAAGCTTCTG CAGGAATTCG ATATCGTCGA CAGATCTCTC
GCCCGCCTAG GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC TATAGCAGCT GTCTAGAGAG
XbaI ApaI KpnI KpnI
751 GAGTCTAGAA CTAGTGGGCC CGGTACCTTA ATTAATTAAG GTACCAGGTA
CTCAGATCTT GATCACCCGG GCCATGGAAT TAATTAATTC CATGGTCCAT
pCMV-N-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-His)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I
pCMV-N-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-His once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241 |
Pvu I CG,AT`CG 849 |
pCMV-N-His质粒中对于插入片断进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列
如下:
T3 primer(620–639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(815-836): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-His的全序列信息: PHWE4514 pCMV-N-His-seq.txt