产品简介:
pp53-TA-luc(报告基因质粒)是上海华潍自行研发的用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。
pp53-TA-luc是以上海华潍的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。
pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的
新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
pp53-TA-luc质粒的主要信息如下:
Base pairs 5659
p53 response element 20-73
Minimal TA promoter (pTA) 96-118
luc2 reporter gene 160-1812
SV40 late poly(A) signal 1847-2068
SV40 early enhancer/promoter 2116-2534
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region 2559-3353
Synthetic poly(A) signal 3378-3426
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 3493-3512
ColE1-derived plasmid replication origin 3750
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 4541-5401
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 5506-5659
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 5608-5627
pp53-TA-luc的多克隆位点及p53 response element的详细图谱如下:
BglI KpnI p53 response element
1 GGCCTAACTG GCCGGTACCA CGTTTGCCTT GCCTGGACTT GCCTGGCCTT
CCGGATTGAC CGGCCATGGT GCAAACGGAA CGGACCTGAA CGGACCGGAA
BglII HindIII
51 GCCTTGGACA TGCCCGGGCT GTCAGATCTG CAGAAGCTTA GACACTAGAG
CGGAACCTGT ACGGGCCCGA CAGTCTAGAC GTCTTCGAAT CTGTGATCTC
Minimal TA promoter
101 GGTATATAAT GGAAGCTCGA CTTCCAGCTT GGCAATCCGG TACTGTTGGT
CCATATATTA CCTTCGAGCT GAAGGTCGAA CCGTTAGGCC ATGACAACCA
pp53-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pp53-TA-luc)包括:
Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I BspM II
BssH II Eco72 I EcoR I EcoR V Mlu I Nde I Nhe I Nru I
PaeR7 I PflM I Pme I Pml I Psp1406 I Rsr II Sac I SnaB I
Spl I Tth111 I Vsp I Xcm I Xho I Xmn I
pp53-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pp53-TA-luc once)包括:
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 |
EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3034 |
pp53-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3 (5608-5627):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pp53-TA-luc的全序列信息: PHWE4000 pp53-TA-luc-seq.txt