产品简介:
pCMV-C-CFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含CFP(Cyan FluorescentProtein, 青色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个CFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有CFP标签的融合蛋白。利用CFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用CFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。CFP与GFP高度相似,可尝试用GFP抗体检测CFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-CFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Multiple cloning site 651-740
CFP 741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site 1510-1531
SV40 polyA signal 1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication 2064-2370
bla promoter 2395-2519
SV40 promoter 2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3704-4162
pUC origin 4291-4958
pCMV-C-CFP的多克隆位点的详细图谱如下:
SmaI PstI
SacI SacII NotI XmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SalI XhoI XbaI CFP
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA ATGGTGAGCA
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT TACCACTCGT
751 AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT CGAGCTGGAC
TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG GGTAGGACCA GCTCGACCTG
801 GGCGACGTAA ACGGCCACAG GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG GCGAGGGCGA
CCGCTGCATT TGCCGGTGTC CAAGTCGCAC AGGCCGCTCC CGCTCCCGCT
851 TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT CATCTGCACC ACCGGCAAGC
ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA GTAGACGTGG TGGCCGTTCG
901 TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCCTGACCTG GGGCGTGCAG
ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT GGGACTGGAC CCCGCACGTC
951 TGCTTCAGCC GCTACCCCGA CCACATGAAG CAGCACGACT TCTTCAAGTC
ACGAAGTCGG CGATGGGGCT GGTGTACTTC GTCGTGCTGA AGAAGTTCAG
1001 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG TACCATCTTC TTCAAGGACG
GCGGTACGGG CTTCCGATGC AGGTCCTCGC ATGGTAGAAG AAGTTCCTGC
1051 ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG CGACACCCTG
TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT TCAAGCTCCC GCTGTGGGAC
1101 GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC TTCAAGGAGG ACGGCAACAT
CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG AAGTTCCTCC TGCCGTTGTA
1151 CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTACAT CAGCCACAAC GTCTATATCA
GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGATGTA GTCGGTGTTG CAGATATAGT
1201 CCGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG CCCACTTCAA GATCCGCCAC
GGCGGCTGTT CGTCTTCTTG CCGTAGTTCC GGGTGAAGTT CTAGGCGGTG
1251 AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC AGCAGAACAC
TTGTAGCTCC TGCCGTCGCA CGTCGAGCGG CTGGTGATGG TCGTCTTGTG
1301 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAACCAC TACCTGAGCA
GGGGTAGCCG CTGCCGGGGC ACGACGACGG GCTGTTGGTG ATGGACTCGT
1351 CCCAGTCCGC CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA TCACATGGTC
GGGTCAGGCG GGACTCGTTT CTGGGGTTGC TCTTCGCGCT AGTGTACCAG
1401 CTGCTGGAGT TCGTGACCGC CGCCGGGATC ACTCTCGGCA TGGACGAGCT
GACGACCTCA AGCACTGGCG GCGGCCCTAG TGAGAGCCGT ACCTGCTCGA
ApaI
1451 GTACAAGTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC AGGTAAGTGT
CATGTTCATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG TCCATTCACA
pCMV-C-CFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-CFP)包括:
AclI AfeI AflII AgeI AhdI AscI AsiSI
BaeI BbsI BbvCI BlpI BmgBI BsiWI BsmBI
BspEI BspQI BssHII BstEII BstZ17I EarI EcoNI
FseI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI PshAI
PspXI SapI SbfI ScaI SgrAI SpeI SwaI
XcmI XmnI
pCMV-C-CFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-CFP once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
PspOMI G`GGCC,C 1461
ApaII G,GGCC`C 1461
PvuI CG,AT`CG 1541 |
pCMV-C-CFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′
C-CFP primer (852-873): 5′- GGGTCAGCTTGCCGTAGGTGGC -3′
pCMV-C-CFP的全序列信息:PHWE4400 pCMV-C-CFP-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放
于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。