产品简介:
Taq DNA Polymerase简称Taq酶,是最常用的DNA聚合酶之一。
Taq DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Thermus aquaticus的高度热稳定的DNA聚合酶,95℃孵育时的半衰期大于40分钟。Taq酶的分子量为94 kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。Taq酶没有3'至5'的外切酶活性,有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶没有3'至5'的外切酶活性,因此在DNA聚合过程中相当于核苷酸转移酶的作用,最终会导致PCR产物的3'末端会产生3'-dA overhangs,即产生带一个A的3'粘端。
来源:本Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
用途:PCR、DNA标记和测序等。
本Taq酶可以扩增长度达5kb的DNA片断,最长可以扩增长达8kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。
用本Taq酶扩增产生的PCR产物带有3'-dA overhangs,可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
PCR反应过程中可以掺入生物素、地高辛或一些荧光机团标记的脱氧核苷酸,即可以用核酸的标记反应。
本Taq酶除用于各种PCR扩增以及DNA标记外,还可以用于DNA测序。
活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction(adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml[3H]dTTP。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5%(v/v)Nonidet P40, 0.5%(v/v)Tween 20 and 50%(v/v)glycerol。
10×PCR Buffer(with Mg2+):100 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8%(v/v)Nonidet P40。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Taq酶失活,加入脱氧胆酸钠至0.06%,SDS至0.01%,或sarkosyl至0.02%均可以抑制Taq酶。
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2x10-5,对于大于1kb的DNA片断的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶,例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测,Taq DNA polymerase是最佳选择。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。