产品简介:
pCMV-C-YFP是上海华潍自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含YFP(Yellow FluorescentProtein, 黄色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个YFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有YFP标签的融合蛋白。利用YFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白表达水平和细胞内定位,也可以利用YFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。YFP与GFP高度相似,可尝试用GFP抗体检测YFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-YFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Multiple cloning site 651-740
YFP 741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site 1510-1531
SV40 polyAsignal 1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication 2064-2370
bla promoter 2395-2519
SV40 promoter 2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3704-4162
pUC origin 4291-4958
pCMV-C-YFP的多克隆位点的详细图谱如下:
SmaI PstI
SacI SacII NotI XmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI YFP
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA ATGGTGAGCA
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT TACCACTCGT
751 AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT CGAGCTGGAC
TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG GGTAGGACCA GCTCGACCTG
801 GGCGACGTAA ACGGCCACAA GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG GCGAGGGCGA
CCGCTGCATT TGCCGGTGTT CAAGTCGCAC AGGCCGCTCC CGCTCCCGCT
851 TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT CATCTGCACC ACCGGCAAGC
ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA GTAGACGTGG TGGCCGTTCG
901 TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCTTCGGCTA CGGCGTGCAG
ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT GGAAGCCGAT GCCGCACGTC
951 TGCTTCGCCC GCTACCCCGA CCACATGCGC CAGCACGACT TCTTCAAGTC
ACGAAGCGGG CGATGGGGCT GGTGTACGCG GTCGTGCTGA AGAAGTTCAG
1001 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG CACCATCTTC TTCAAGGACG
GCGGTACGGG CTTCCGATGC AGGTCCTCGC GTGGTAGAAG AAGTTCCTGC
1051 ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG CGACACCCTG
TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT TCAAGCTCCC GCTGTGGGAC
1101 GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC TTCAAGGAGG ACGGCAACAT
CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG AAGTTCCTCC TGCCGTTGTA
1151 CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTACAA CAGCCACAAC GTCTATATCA
GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGATGTT GTCGGTGTTG CAGATATAGT
1201 TGGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG TGAACTTCAA GATCCGCCAC
ACCGGCTGTT CGTCTTCTTG CCGTAGTTCC ACTTGAAGTT CTAGGCGGTG
1251 AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC AGCAGAACAC
TTGTAGCTCC TGCCGTCGCA CGTCGAGCGG CTGGTGATGG TCGTCTTGTG
1301 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAACCAC TACCTGAGCT
GGGGTAGCCG CTGCCGGGGC ACGACGACGG GCTGTTGGTG ATGGACTCGA
1351 ACCAGTCCGC CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA TCACATGGTC
TGGTCAGGCG GGACTCGTTT CTGGGGTTGC TCTTCGCGCT AGTGTACCAG
1401 CTGCTGGAGT TCGTGACCGC CGCCGGGATC ACTCTCGGCA TGGACGAGCT
GACGACCTCA AGCACTGGCG GCGGCCCTAG TGAGAGCCGT ACCTGCTCGA
ApaI
1451 GTACAAGTAA GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC AGGTAAGTGT
CATGTTCATT CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG TCCATTCACA
pCMV-C-YFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-YFP)包括:
AclI AfeI AflII AgeI AhdI AscI AsiSI
BaeI BbsI BbvCI BlpI BmgBI BsiWI BsmBI
BspEI BspQI BssHII BstEII BstZ17I EarI EcoNI
FseI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI PshAI
PspXI SapI SbfI ScaI SgrAI SpeI SwaI
XcmI XmnI
pCMV-C-YFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-YFP once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
PspOMI G`GGCC,C 1461
ApaI G,GGCC`C 1461
PvuI CG,AT`CG 1541 |
pCMV-C-YFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′
C-YFP primer (852-873): 5′- GGGTCAGCTTGCCGTAGGTGGC -3′
pCMV-C-YFP的全序列信息:PHWE4407 pCMV-C-YFP-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。