产品简介:
pCMV-N-HA是上海华潍自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-HA质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
HA tag 679–705
multiple cloning site 708–781
T7 promoter and T7 primer binding site 824–845
SV40 polyA signal 857–1240
f1 origin of ss-DNA replication 1378–1684
bla promoter 1709–1833
SV40 promoter 1853–2191
neomycin/kanamycin resistance ORF 2226–3017
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal 3018–3476
pUC origin 3605–4272
pCMV-N-HA的多克隆位点的详细图谱如下:
HA tag
SacI M Y P Y D V P D Y
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGTA CCCATACGAT GTTCCAGATT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACAT GGGTATGCTA CAAGGTCTAA
XmaI PstI
A SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI
701 ACGCTAGCCC GGGCGGATCC AAGCTTCTGC AGGAATTCGA TATCGTCGAC
TGCGATCGGG CCCGCCTAGG TTCGAAGACG TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG
BglII XbaI SpeI ApaI
751 AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC GGTACCTTAA TTAATTAAGG
TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG CCATGGAATT AATTAATTCC
pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I
pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241 |
Pvu I CG,AT`CG 858 |
pCMV-N-HA质粒中对于插入片断进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620–639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(824-845): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-HA的全序列信息: PHWE4510 pCMV-N-HA-seq.txt