产品简介:
pCMV-C-Flag是上海华潍自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-Flag质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
multiple cloning site 680-740
c-Flag tag 741-764
T7 promoter and T7 primer binding site 817-838
SV40 polyA signal 850-1233
f1 origin of ss-DNA replication 1371-1675
bla promoter 1700-1824
SV40 promoter 1844-2182
neomycin/kanamycin resistance ORF 2217-3008
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3009-3467
pUC origin 3596-4263
pCMV-C-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
XmaI PstI
SacI Small BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
Flag
EcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI D Y K D
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA GATTACAAGG
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT CTAATGTTCC
tag
D D D K ApaI
751 ATGACGACGA TAAGTAAGGG CCCGGTACCT TAATTAATTA AGGTACCAGG
TACTGCTGCT ATTCATTCCC GGGCCATGGA ATTAATTAAT TCCATGGTCC
pCMV-C-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Flag)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spe I
pCMV-C-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Flag once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241 |
Pvu I CG,AT`CG 851 |
pCMV-C-Flag质粒中对于插入片断进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(817-838): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-Flag的全序列信息: D2632 pCMV-C-Flag-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。