产品简介：

    pGL6-miR(报告基因质粒)是碧云天自行研发的一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点，然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3’-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。
    pGL6-miR以碧云天的pGL6质粒为模板，具有氨苄青霉素抗性，并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点，便于插入目的基因的3’-UTR或其它适当的靶序列。
    pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游，转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合，通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解，从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平，可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变，用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后，miRNA的调控作用消失，则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。
    pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子，有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用，即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。
    pGL6-miR质粒的主要信息如下：
    Base pairs                                                               6097bp
    Feature Nucleotide                                                       Position
    PGK promoter                                                             20-538
    luc2 reporter gene                                                       549-2202
    Multiple cloning region                                                  2208-2261
    SV40 late poly（A） sinal                                                2268-2512
    SV40 early enhancer/promoter                                             2554-2972
    Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region                 2998-3792
    Synthetic poly(A) signal                                                 3817-3865
    Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region                             4980-5840
    Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site                      5945-6097
       pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱如下(请特别注意其中的NheI不是单酶切位点)：
                                                  KpnI   NheI 
    2169 AGGCCAAGAA GGGCGGCAAG ATCGCCGTGT AAAGATCCGG TACCGCTAGC
         TCCGGTTCTT CCCGCCGTTC TAGCGGCACA TTTCTAGGCC ATGGCGATCG
         BamHI EcoRV  XhoI  SacI    MluI  BglII HindIII
    2220 GGATCCGATA TCCTCGAGGA GCTCACGCGT AGATCTAAGC TTCGATCTCG
         CCTAGGCTAT AGGAGCTCCT CGAGTGCGCA TCTAGATTCG AAGCTAGAGC
    pGL6-miR中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括：
    Aat II      Afl II         Asc I       Ase I         Bsa I      BsaA I      BsiW I
    BssH II     Eco72 I        EcoR I      Nde I         Nru I      PflM I      Pme I
    Pml I       Psp1406 I      PspA I      Rsr II        Sam I      SnaB I      Spl I
    Srf I       Tth111 I       Vsp I       Xcm I 
    pGL6-miR中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括：

    pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
    Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
    Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
    pGL6-miR的全序列信息： PHWE3883 pGL6-miR-seq.txt

保存条件：
   -20℃保存。
注意事项：
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。