产品简介:
pRb-TA-luc(报告基因质粒)是上海华潍自行研发的用于检测Rb(retinoblastoma protein)转录抑制活
性水平的报告基因质粒。pRb-TA-luc是以上海华潍的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个Rb结合位点,可以高灵敏度地检测Rb的转录抑制活性水平。Rb可以和E2F等转录因子结合,抑制这些转录因子的激活,抑制细胞周期的进展。Rb同时也可以作为一个抑制性转录因子直接结合到其响应的顺式作用元件,抑制该基因的转录。
pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
pRb-TA-luc质粒的主要信息如下:
Base pairs 5677
Rb response element 32-91
Minimal TA promoter (pTA) 114-136
luc2 reporter gene 178-1830
SV40 late poly(A) signal 1865-2086
SV40 early enhancer/promoter 2134-2552
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region 2577-3371
Synthetic poly(A) signal 3396-3444
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 3511-3530
ColE1-derived plasmid replication origin 3768
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 4559-5419
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 5524-5677
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 5626-5645
pRb-TA-luc的多克隆位点及Rb response element的详细图谱如下:
BglI KpnI NheI XhoI Rb response elememt
1 GGCCTAACTG GCCGGTACCG CTAGCCTCGA GCCCGCGCGC CACCCCTCTG
CCGGATTGAC CGGCCATGGC GATCGGAGCT CGGGCGCGCG GTGGGGAGAC
Rb response elememt BglII
51 GCGCCACCGT GCCCGCGCGC CACCCCTCTG GCGCCACCGT GAGATCTGCA
CGCGGTGGCA CGGGCGCGCG GTGGGGAGAC CGCGGTGGCA CTCTAGACGT
HindIII Minimal TA promoter
101 GAAGCTTAGA CACTAGAGGG TATATAATGG AAGCTCGACT TCCAGCTTGG
CTTCGAATCT GTGATCTCCC ATATATTACC TTCGAGCTGA AGGTCGAACC
pRb-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pRb-TA-luc)包括:
Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I BspM II
Eco72 I EcoR I EcoR V Mlu I Nde I Nru I PflM I Pme I
Pml I Psp1406 I PspA I Rsr II Sac I Sma I SnaB I Spl I
Srf I Tth111 I Vsp I Xcm I Xma I Xmn I
pRb-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pRb-TA-luc once)包括:
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 |
EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3052 |
pRb-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3(5626-5645):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pRb-TA-luc的全序列信息:PHWE4025-pRb-TA-luc-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。