TS002 VEGFR抑制剂对重组VEGFR2蛋白激酶活性分析

公司概况
济南华维医药科技有限公司（原上海华潍医药正式迁入山东济南药谷）是中国一流的新药筛选专业CRO公司，本公司专注于提供1.1类新药在分子水平、细胞水平、动物水平上的药效学筛选服务。

  济南华维在分子水平上可以提供的筛选服务包括，聚合ADP核糖聚合酶，酪氨酸激酶，蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)，丝/苏氨酸激酶，组蛋白去乙酰化酶，组蛋白去甲基化酶，组蛋白甲基转移酶，DNA甲基转移酶，热休克蛋白，基质金属蛋白酶，抑制微管蛋白聚集及解聚酶，蛋白酶体，拓扑异构酶，二肽基肽酶，去乙酰化酶，过氧化物酶体增殖剂激活受体，其他与代谢相关的酶，细胞毒T淋巴细胞相关抗原4，磷酸二酯酶，磷脂酶A，调节血脂，抗病毒，抗凝血，抗高血压，溴结构域蛋白，组织蛋白酶，凋亡相关，泛素相关，β淀粉样蛋白，乙酰胆碱酯酶等，共计500余种新药靶点，涉及的疾病种类为抗肿瘤，抗糖尿病，抗炎症，免疫调节，抗病毒，心脑血管病，血液系统疾病，阿尔茨海默病等。

  济南华维在细胞水平上可以针对十几条主要的信号通路进行抑制剂的筛选，包括 cAMP/CRE/CREB通路， Hedgehog通路， JAK/STAT通路，JNK通路，. MEK/ERK通路，NF-KB通路， Notch通路， Nrf2 antioxidant通路， PI3K/AKT通路， Wnt/ catenin通路，RAR Nuclear receptor通路，TGF/SMAD通路。我公司建有较齐全的细胞库，可以针对各种正常细胞及肿瘤细胞开展细胞增殖抑制实验，细胞周期阻滞实验，细胞凋亡实验，细胞迁移实验，细胞转染及RNA干扰实验，细胞集落形成实验，针对耐药细胞株的增殖抑制实验，细胞水平的P糖蛋白底物抑制剂检测，DNA Ladder实验，基因过表达及基因沉默实验，细胞骨架免疫荧光实验，蛋白免疫印迹Western blot 实验，大鼠动脉环实验，HUVEC的管腔形成实验，活细胞水平HDAC抑制的测试，PARP的增敏细胞实验。

济南华维拥有符合国际标准的动物饲养管理设施和现代化的功能实验室。动物饲养设施可饲养裸鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、兔等实验动物；技术人员熟练掌握静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、口服给药、经皮给药、吸入及鼻腔喷雾、滴眼及视网膜下注射等给药方式及动静脉等多种取血方式。可以对抗肿瘤药物，抗糖尿病药物及抗炎症药物，通过相应的实验动物模型进行药效学评价。

济南华维的核心团队均具有博士学位，在大型制药企业或CRO公司从事过多年的药物筛选与开发经验，曾成功完成近百个IND的研究与申报，涵盖药物研发的多数热点领域。公司还拥有强大的顾问团队，他们均来自于药物研发的一线，能够精确把握最新的药物筛选与开发的热点技术和趋势，他们分别就职于国内外著名的科研院所、监管评审机构以及世界前十大药厂。本公司可以为客户提供最热门药物靶点相关的新药快速筛选的相关CRO服务，可以极大的提高客户进行新药筛选的实验效率，节约实验成本。

济南华维将以最先进的理念和最高的质量服务于客户，以缩短客户研发周期和减少客户研发成本为服务宗旨，在生物技术领域提供一如既往高品质的产品与服务，期待与您的合作！
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TS002 VEGFR抑制剂对重组VEGFR2蛋白激酶活性分析
VEGFR抑制剂对重组VEGFR2蛋白激酶活性分析

具体实验步骤如下：

1）将酶反应底物 Poly (Glu,Tyr) 4:1用无钾离子的 PBS（10 mM 磷酸钠缓冲液，150 mM NaCl, pH7.2-7.4）稀释成不同浓度，125 μl/孔包被酶标板，置 37°C反应12-16 h。弃去孔中液体。

2）洗板，用200 μl/孔T-PBS（含 0.1%Tween-20的PBS）洗板三次，每次5 min。

3）于 37 °C 烘箱中干燥酶标板1-2 h。

4）每孔加入不同浓度的蛋白酪氨酸激酶50 μL，然后加入2×反应缓冲液（HEPES (pH 7.4) 100 mM, Na₃VO₄0.4 mM, DTT 2 mM 加入不同浓度的 MgCl₂和 MnCl₂）稀释的不同浓度的ATP 溶液50 μL启动反应，置 37°C 摇床反应1 h。T-PBS 洗板3次。

5）加入一抗 PY99 100 μl/孔（抗体用含BSA 5 mg/ml 的T-PBS 稀释，浓度为0.4 μg/ml），25°C摇床反应1 h，T-PBS 洗板三次。

6）加入二抗辣根过氧化物酶标记羊抗鼠的IgG 100 μl/孔（抗体用含BSA 5 mg/ml 的 T-PBS 稀释，浓度为 0.5 μg/ml），25°C 摇床反应1 h，T-PBS 洗板三次。

7）加入2 mg/ml 的 OPD 显色液100 μl/孔（用含有0.03% H₂O₂的 0.1 M 柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液（pH=5.4）稀释），25°C避光反应 1-10 min。（OPD 溶解时需用超声，显色液需现配现用）。

8）加入2 M H₂SO₄ 50 μl/孔中止反应，用可调波长式微孔板酶标仪 SPECTRA MAX 190 读数，波长为492 nm。
2012-09-01