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济南华维医药科技有限公司
Huawei Pharmaceutical Co. Ltd.
  • 公司概况
  • 济南华维医药科技有限公司(原上海华潍医药正式迁入山东济南药谷)是中国一流的新药筛选专业CRO公司,本公司专注于提供1.1类新药在分子水平、细胞水平、动物水平上的药效学筛选服务。

          济南华维在分子水平上可以提供的筛选服务包括,聚合ADP核糖聚合酶,酪氨酸激酶,蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP),丝/苏氨酸激酶,组蛋白去乙酰化酶,组蛋白去甲基化酶,组蛋白甲基转移酶,DNA甲基转移酶,热休克蛋白,基质金属蛋白酶,抑制微管蛋白聚集及解聚酶,蛋白酶体,拓扑异构酶,二肽基肽酶,去乙酰化酶,过氧化物酶体增殖剂激活受体,其他与代谢相关的酶,细胞毒T淋巴细胞相关抗原4,磷酸二酯酶,磷脂酶A,调节血脂,抗病毒,抗凝血,抗高血压,溴结构域蛋白,组织蛋白酶,凋亡相关,泛素相关,β淀粉样蛋白,乙酰胆碱酯酶等,共计500余种新药靶点,涉及的疾病种类为抗肿瘤,抗糖尿病,抗炎症,免疫调节,抗病毒,心脑血管病,血液系统疾病,阿尔茨海默病等。

          济南华维在细胞水平上可以针对十几条主要的信号通路进行抑制剂的筛选,包括 cAMP/CRE/CREB通路, Hedgehog通路, JAK/STAT通路,JNK通路,. MEK/ERK通路,NF-KB通路, Notch通路, Nrf2 antioxidant通路, PI3K/AKT通路, Wnt/ catenin通路,RAR Nuclear receptor通路,TGF/SMAD通路。我公司建有较齐全的细胞库,可以针对各种正常细胞及肿瘤细胞开展细胞增殖抑制实验,细胞周期阻滞实验,细胞凋亡实验,细胞迁移实验,细胞转染及RNA干扰实验,细胞集落形成实验,针对耐药细胞株的增殖抑制实验,细胞水平的P糖蛋白底物抑制剂检测,DNA Ladder实验,基因过表达及基因沉默实验,细胞骨架免疫荧光实验,蛋白免疫印迹Western blot 实验,大鼠动脉环实验,HUVEC的管腔形成实验,活细胞水平HDAC抑制的测试,PARP的增敏细胞实验。

    济南华维拥有符合国际标准的动物饲养管理设施和现代化的功能实验室。动物饲养设施可饲养裸鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、兔等实验动物;技术人员熟练掌握静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、口服给药、经皮给药、吸入及鼻腔喷雾、滴眼及视网膜下注射等给药方式及动静脉等多种取血方式。可以对抗肿瘤药物,抗糖尿病药物及抗炎症药物,通过相应的实验动物模型进行药效学评价。

           济南华维的核心团队均具有博士学位,在大型制药企业或CRO公司从事过多年的药物筛选与开发经验,曾成功完成近百个IND的研究与申报,涵盖药物研发的多数热点领域。公司还拥有强大的顾问团队,他们均来自于药物研发的一线,能够精确把握最新的药物筛选与开发的热点技术和趋势,他们分别就职于国内外著名的科研院所、监管评审机构以及世界前十大药厂。本公司可以为客户提供最热门药物靶点相关的新药快速筛选的相关CRO服务,可以极大的提高客户进行新药筛选的实验效率,节约实验成本。        

           济南华维将以最先进的理念和最高的质量服务于客户,以缩短客户研发周期和减少客户研发成本为服务宗旨,在生物技术领域提供一如既往高品质的产品与服务,期待与您的合作!








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  • 服务描述
  • 4.2.6 细胞凋亡实验

    【生物背景】

    细胞凋亡是一个主动的信号依赖过程,可由许多因素诱导,如放射线照射、缺血缺氧、病毒感染、药物及毒素等。这些因素大多可通过激活死亡受体而触发细胞凋亡机制。死亡受体存在于细胞表面。属于肿瘤坏死因子受体超家族,它们与相应的配体或抗体结合而活化后,其胞浆区即可与一些信号转导蛋白结合,其中重要的是含有死亡结构域的胞浆蛋白。它们通过死亡结构域一方面与死亡受体相连,另一方面与下游的capase蛋白酶结合,使细胞膜表面的死亡信号传递到细胞内。capase蛋白酶家族作为细胞凋亡的执行者,它们活化后进一步剪切底物,如多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)该酶与DNA修复及基因完整性监护有关,PARP被剪切后,失去正常的功能,使受其抑制的核酸内切酶活性增高,裂解核小体间的DNA,最终引起细胞凋亡。这个过程可概括为:死亡受体含有死亡结构域的胞浆蛋白—capase蛋白酶家族—底物PARP—染色体断裂—细胞凋亡。不同种类的细胞在接受不同的细胞外刺激后引起凋亡的形态学改变是高度保守的,但是它们并不是遵循同一种固定的或有规律的模式进行,而是通过各自的信号转导途径来传递胞膜上的死亡。

     

    磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)是分析凋亡细胞的常用方法。磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KDCa2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITCPE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-VPI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

    TUNEL 也是检测细胞凋亡的常见方法。 在细胞凋亡过程中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。

    Caspase-3活性的检测 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞,caspase-3的活性明显下降。 Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及对底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[polyADP-ribosepolymerasePARP]等的裂解。

    【筛选项目】

    Cell apoptosis Assays

    1Annexin-v-FITC / PI双染法;

    2TUNEL法;

    3Caspase-3激活;

     

    筛选价格

    周期:4-6

    送样量2~3mg

    每个化合物测试每个细胞株的细胞凋亡影响:360/孔。(起测量至少8个孔)

       

    【结果例】

    Q1(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。

    Q2: (AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞。

    Q3(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。

    Q4(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

     


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