产品简介:
本PCR试剂盒带有BeyoTaq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液,自备模板和引物即可进行PCR反应,适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等,能在高效扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。
BeyoTaq DNA Polymerase简称BeyoTaq酶,是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶。
BeyoTaq酶可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时BeyoTaq酶有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)。另外,BeyoTaq酶有5'至3'外切酶活性,但BeyoTaq酶没有反转录酶活性。
由于BeyoTaq酶有3'至5'的外切酶活性,因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低,出错率为1.6×10-6 per nt per cycle,略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
BeyoTaq酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶,和Taq酶的扩增效率比较接近,很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。
用途:高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
用BeyoTaq酶扩增产生的PCR产物带有3'-dA overhangs,可以用于基于T载体的PCR片断克隆。
BeyoTaq酶可以扩增长度达10kb的DNA片断,最长可以扩增长达30kb的DNA片断。通常适合扩增10kb以下的DNA片断。
活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction(adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM(NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×BeyoTaq Buffer(with Mg2+):200 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl,20 mM MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使BeyoTaq酶失活。
试剂盒带有dNTP,该dNTP为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合物,每种的浓度均为2.5mM。
本试剂盒用于50微升的PCR反应体系,足够用于80个反应,用于20微升的PCR反应体系,足够用于200个反应。
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用BeyoTaq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
BeyoTaq酶有3'至5'的外切酶活性,无dNTP时可以降解引物。因此BeyoTaq酶一定要最后加入,并且要在冰浴上操作。
不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代BeyoTaq酶的PCR Buffer。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。