产品简介:
pCMV-N-mCherry是上海华潍自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个mCherry的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
mCherry 677-1384
Multiple cloning site 1385-1474
T7 promoter and T7 primer binding site 1494-1515
SV40 polyA signal 1527-1910
f1 origin of ss-DNA replication 2048-2354
bla promoter 2379-2503
SV40 promoter 2523-2861
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2896-3687
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3688-4146
pUC origin 4275-4942
pCMV-N-mCherry的多克隆位点的详细图谱如下:
SacI mCherry
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC GCCACCATGG TGAGCAAGGG CGAGGAGGAT
CTCGAGATCG CGATGGCCAG CGGTGGTACC ACTCGTTCCC GCTCCTCCTA
701 AACATGGCCA TCATCAAGGA GTTCATGCGC TTCAAGGTGC ACATGGAGGG
TTGTACCGGT AGTAGTTCCT CAAGTACGCG AAGTTCCACG TGTACCTCCC
751 CTCCGTGAAC GGCCACGAGT TCGAGATCGA GGGCGAGGGC GAGGGCCGCC
GAGGCACTTG CCGGTGCTCA AGCTCTAGCT CCCGCTCCCG CTCCCGGCGG
801 CCTACGAGGG CACCCAGACC GCCAAGCTGA AGGTGACCAA GGGTGGCCCC
GGATGCTCCC GTGGGTCTGG CGGTTCGACT TCCACTGGTT CCCACCGGGG
851 CTGCCCTTCG CCTGGGACAT CCTGTCCCCT CAGTTCATGT ACGGCTCCAA
GACGGGAAGC GGACCCTGTA GGACAGGGGA GTCAAGTACA TGCCGAGGTT
901 GGCCTACGTG AAGCACCCCG CCGACATCCC CGACTACTTG AAGCTGTCCT
CCGGATGCAC TTCGTGGGGC GGCTGTAGGG GCTGATGAAC TTCGACAGGA
951 TCCCCGAGGG CTTCAAGTGG GAGCGCGTGA TGAACTTCGA GGACGGCGGC
AGGGGCTCCC GAAGTTCACC CTCGCGCACT ACTTGAAGCT CCTGCCGCCG
1001 GTGGTGACCG TGACCCAGGA CTCCTCCCTG CAGGACGGCG AGTTCATCTA
CACCACTGGC ACTGGGTCCT GAGGAGGGAC GTCCTGCCGC TCAAGTAGAT
1051 CAAGGTGAAG CTGCGCGGCA CCAACTTCCC CTCCGACGGC CCCGTAATGC
GTTCCACTTC GACGCGCCGT GGTTGAAGGG GAGGCTGCCG GGGCATTACG
1101 AGAAGAAGAC CATGGGCTGG GAGGCCTCCT CCGAGCGGAT GTACCCCGAG
TCTTCTTCTG GTACCCGACC CTCCGGAGGA GGCTCGCCTA CATGGGGCTC
1151 GACGGCGCCC TGAAGGGCGA GATCAAGCAG AGGCTGAAGC TGAAGGACGG
CTGCCGCGGG ACTTCCCGCT CTAGTTCGTC TCCGACTTCG ACTTCCTGCC
1201 CGGCCACTAC GACGCTGAGG TCAAGACCAC CTACAAGGCC AAGAAGCCCG
GCCGGTGATG CTGCGACTCC AGTTCTGGTG GATGTTCCGG TTCTTCGGGC
1251 TGCAGCTGCC CGGCGCCTAC AACGTCAACA TCAAGTTGGA CATCACCTCC
ACGTCGACGG GCCGCGGATG TTGCAGTTGT AGTTCAACCT GTAGTGGAGG
1301 CACAACGAGG ACTACACCAT CGTGGAACAG TACGAACGCG CCGAGGGCCG
GTGTTGCTCC TGATGTGGTA GCACCTTGTC ATGCTTGCGC GGCTCCCGGC
BamHI HindIII
1351 CCACTCCACC GGCGGCATGG ACGAGCTGTA CAAGGGATCC AAGCTTCTGC
GGTGAGGTGG CCGCCGTACC TGCTCGACAT GTTCCCTAGG TTCGAAGACG
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI ApaI
1401 AGGAATTCGA TATCGTCGAC AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC
TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG
pCMV-N-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)
包括:
AclI AflII AscI AsiSI BaeI BcgI BlpI
BmgBI BsiWI BsmBI BspEI BspQI BssHII BstXI
BstZ17I EarI EcoNI FseI NotI NruI PmeI
PmlI PpuMI PshAI PspXI SacII SapI ScaI
SmaI SwaI TspMI XmaI XmnI
pCMV-N-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-EGFP once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
BglII A`GATC,T 1421
PaeR7I C`TCGA,G 1427
XhoI C`TCGA,G 1427 |
pCMV-N-mCherry质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
pCMV-N-mCherry的全序列信息:PHWE4488 pCMV-N-mCherry-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。