产品简介:
pCMV-N-DsRed是上海华潍自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含DsRed (Discosomasp. red fluorescent protein,香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个DsRed的完整编码序列,并且在DsRed前面加入Kozak序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-DsRed质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Kozak sepuence 656-662
DsRed 663-1337
Multiple cloning site 1338-1403
T7 promoter and T7 primer binding site 1446-1468
SV40 polyA signal 1481-1863
f1 origin of ss-DNA replication 2001-2307
bla promoter 2332-2451
SV40 promoter 2476-2814
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2849-3641
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3642-4099
pUC origin 4226-4892
pCMV-N-DsRed的多克隆位点的详细图谱如下:
SacI Kozak DsRedM
651 GAGCTCGCCA CCATGGACAA CACCGAGGAC GTCATCAAGG AGTTCATGCA
CTCGAGCGGT GGTACCTGTT GTGGCTCCTG CAGTAGTTCC TCAAGTACGT
701 GTTCAAGGTG CGCATGGAGG GCTCCGTGAA CGGCCACTAC TTCGAGATCG
CAAGTTCCAC GCGTACCTCC CGAGGCACTT GCCGGTGATG AAGCTCTAGC
751 AGGGCGAGGG CGAGGGCAAG CCCTACGAGG GCACCCAGAC CGCCAAGCTG
TCCCGCTCCC GCTCCCGTTC GGGATGCTCC CGTGGGTCTG GCGGTTCGAC
801 CAGGTGACCA AGGGCGGCCC CCTGCCCTTC GCCTGGGACA TCCTGTCCCC
GTCCACTGGT TCCCGCCGGG GGACGGGAAG CGGACCCTGT AGGACAGGGG
851 CCAGTTCCAG TACGGCTCCA AGGCCTACGT GAAGCACCCC GCCGACATCC
GGTCAAGGTC ATGCCGAGGT TCCGGATGCA CTTCGTGGGG CGGCTGTAGG
901 CCGACTACAT GAAGCTGTCC TTCCCCGAGG GCTTCACCTG GGAGCGCTCC
GGCTGATGTA CTTCGACAGG AAGGGGCTCC CGAAGTGGAC CCTCGCGAGG
951 ATGAACTTCG AGGACGGCGG CGTGGTGGAG GTGCAGCAGG ACTCCTCCCT
TACTTGAAGC TCCTGCCGCC GCACCACCTC CACGTCGTCC TGAGGAGGGA
1001 GCAGGACGGC ACCTTCATCT ACAAGGTGAA GTTCAAGGGC GTGAACTTCC
CGTCCTGCCG TGGAAGTAGA TGTTCCACTT CAAGTTCCCG CACTTGAAGG
1051 CCGCCGACGG CCCCGTAATG CAGAAGAAGA CTGCCGGCTG GGAGCCCTCC
GGCGGCTGCC GGGGCATTAC GTCTTCTTCT GACGGCCGAC CCTCGGGAGG
1101 ACCGAGAAGC TGTACCCCCA GGACGGCGTG CTGAAGGGCG AGATCTCCCA
TGGCTCTTCG ACATGGGGGT CCTGCCGCAC GACTTCCCGC TCTAGAGGGT
1151 CGCCCTGAAG CTGAAGGACG GCGGCCACTA CACCTGCGAC TTCAAGACCG
GCGGGACTTC GACTTCCTGC CGCCGGTGAT GTGGACGCTG AAGTTCTGGC
1201 TGTACAAGGC CAAGAAGCCC GTGCAGCTGC CCGGCAACCA CTACGTGGAC
ACATGTTCCG GTTCTTCGGG CACGTCGACG GGCCGTTGGT GATGCACCTG
1251 TCCAAGCTGG ACATCACCAA CCACAACGAG GACTACACCG TGGTGGAGCA
AGGTTCGACC TGTAGTGGTT GGTGTTGCTC CTGATGTGGC ACCACCTCGT
BamHI HindIII
1301 GTACGAGCAC GCCGAGGCCC GCCACTCCGG CTCCCAGGGA TCCAAGCTTC
CATGCTCGTG CGGCTCCGGG CGGTGAGGCC GAGGGTCCCT AGGTTCGAAG
EcoRI EcoRV SalI XhoI XbaI SpeI ApaI
1351 TGCAGGAATT CGATATCGTC GACAGATCTC TCGAGTCTAG AACTAGTGGG
ACGTCCTTAA GCTATAGCAG CTGTCTAGAG AGCTCAGATC TTGATCACCC
pCMV-N-DsRed中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括:
AclI AflII AgeI AscI AsiSI BaeI
BcgI BlpI BmgBI Bpu10I BsiWI BsmBI
BspQI BssHII BstXI BstZ17I EarI EcoNI
NruI PmeI PmlI PpuMI PshAI PspXI
SapI ScaI SgrAI SmaI SrfI SwaI
XcmI XmaI XmnI
pCMV-N-DsRed中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
PspOMI G`GGCC,C 1398
ApaI G,GGCC`C 1398
PvuI CG,AT`CG 1478 |
pCMV-N-DsRed质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-DsRed primer (1284-1303): 5′- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3′
T7 primer (1447-1468): 5′- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3′
pCMV-N-DsRed的全序列信息:PHWE4482 pCMV-N-DsRed-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。