产品简介:
pCMV-N-CFP是上海华潍自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含CFP(Cyan FluorescentProtein, 青色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个CFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有CFP标签的融合蛋白。利用CFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达量和细胞内定位,也可以利用CFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。CFP与GFP高度相似,可以尝试用GFP抗体检测CFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-CFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
CFP 677-1393
Multiple cloning site 1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site 1503-1524
SV40 polyA signal 1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication 2057-2363
bla promoter 2388-2512
SV40 promoter 2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2905-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3697-4155
pUC origin 4284-4951
pCMV-N-CFP的多克隆位点的详细图谱如下:
SacI CFP
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC GCCACCATGG TGAGCAAGGG CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG CGATGGCCAG CGGTGGTACC ACTCGTTCCC GCTCCTCGAC
701 TTCACCGGGG TGGTGCCCAT CCTGGTCGAG CTGGACGGCG ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC ACCACGGGTA GGACCAGCTC GACCTGCCGC TGCATTTGCC
751 CCACAGGTTC AGCGTGTCCG GCGAGGGCGA GGGCGATGCC ACCTACGGCA
GGTGTCCAAG TCGCACAGGC CGCTCCCGCT CCCGCTACGG TGGATGCCGT
801 AGCTGACCCT GAAGTTCATC TGCACCACCG GCAAGCTGCC CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA CTTCAAGTAG ACGTGGTGGC CGTTCGACGG GCACGGGACC
851 CCCACCCTCG TGACCACCCT GACCTGGGGC GTGCAGTGCT TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC ACTGGTGGGA CTGGACCCCG CACGTCACGA AGTCGGCGAT
901 CCCCGACCAC ATGAAGCAGC ACGACTTCTT CAAGTCCGCC ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG TACTTCGTCG TGCTGAAGAA GTTCAGGCGG TACGGGCTTC
951 GCTACGTCCA GGAGCGTACC ATCTTCTTCA AGGACGACGG CAACTACAAG
GCTACGTCCA GGAGCGTACC ATCTTCTTCA AGGACGACGG CAACTACAAG
1001 ACCCGCGCCG AGGTGAAGTT CGAGGGCGAC ACCCTGGTGA ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC TCCACTTCAA GCTCCCGCTG TGGGACCACT TGGCGTAGCT
1051 GCTGAAGGGC ATCGACTTCA AGGAGGACGG CAACATCCTG GGGCACAAGC
CGACTTCCCG TAGCTGAAGT TCCTCCTGCC GTTGTAGGAC CCCGTGTTCG
1101 TGGAGTACAA CTACATCAGC CACAACGTCT ATATCACCGC CGACAAGCAG
ACCTCATGTT GATGTAGTCG GTGTTGCAGA TATAGTGGCG GCTGTTCGTC
1151 AAGAACGGCA TCAAGGCCCA CTTCAAGATC CGCCACAACA TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT AGTTCCGGGT GAAGTTCTAG GCGGTGTTGT AGCTCCTGCC
1201 CAGCGTGCAG CTCGCCGACC ACTACCAGCA GAACACCCCC ATCGGCGACG
GTCGCACGTC GAGCGGCTGG TGATGGTCGT CTTGTGGGGG TAGCCGCTGC
1251 GCCCCGTGCT GCTGCCCGAC AACCACTACC TGAGCACCCA GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA CGACGGGCTG TTGGTGATGG ACTCGTGGGT CAGGCGGGAC
1301 AGCAAAGACC CCAACGAGAA GCGCGATCAC ATGGTCCTGC TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG GGTTGCTCTT CGCGCTAGTG TACCAGGACG ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351 GACCGCCGCC GGGATCACTC TCGGCATGGA CGAGCTGTAC AAGGGATCCA
CTGGCGGCGG CCCTAGTGAG AGCCGTACCT GCTCGACATG TTCCCTAGGT
PstI EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
1401 AGCTTCTGCA GGAATTCGAT ATCGTCGACA GATCTCTCGA GTCTAGAACT
TCGAAGACGT CCTTAAGCTA TAGCAGCTGT CTAGAGAGCT CAGATCTTGA
ApaI
1451 AGTGGGCCCG GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACC
TCACCCGGGC CATGGAATTA ATTAATTCCA TGG
pCMV-N-CFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-CFP)包括:
AclI AflII AhdI AscI AsiSI BaeI
BbvCI BlpI BsmBI BsiWI BsmBI BspEI
BssHII BstEII BstXI BstZ17I EarI EcoNI
NotI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI
PspXI SacII SapI SbfI ScaI SgrAI
SwaI TspMI XcmI XmaI XmnI
pCMV-N-CFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-CFP once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
ApaI G,GGCC`C 1454
PvuI CG,AT`CG 1534
BclI T`GATC,A 1690 |
pCMV-N-CFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-CFP primer (1284-1303): 5′-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3′
T7 primer (1503-1524): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
pCMV-N-CFP的全序列信息:PHWE4480 pCMV-N-CFP-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。