产品简介:
pCMV-C-mCherry是上海华潍自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个mCherry的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-mCherry质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Multiple cloning site 651-736
mCherry 741-1451
T7 promoter and T7 primer binding site 1501-1522
SV40 polyAsignal 1534-1917
f1 origin of ss-DNA replication 2055-2361
bla promoter 2386-2510
SV40 promoter 2530-2868
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2903-3694
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3695-4153
pUC origin 4282-4949
pCMV-C-mCherry的多克隆位点的详细图谱如下:
SmaI
SacI SacII NotI XmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI mCherry
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA ATGGTGAGCA
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT TACCACTCGT
751 AGGGCGAGGA GGATAACATG GCCATCATCA AGGAGTTCAT GCGCTTCAAG
TCCCGCTCCT CCTATTGTAC CGGTAGTAGT TCCTCAAGTA CGCGAAGTTC
801 GTGCACATGG AGGGCTCCGT GAACGGCCAC GAGTTCGAGA TCGAGGGCGA
CACGTGTACC TCCCGAGGCA CTTGCCGGTG CTCAAGCTCT AGCTCCCGCT
851 GGGCGAGGGC CGCCCCTACG AGGGCACCCA GACCGCCAAG CTGAAGGTGA
CCCGCTCCCG GCGGGGATGC TCCCGTGGGT CTGGCGGTTC GACTTCCACT
901 CCAAGGGTGG CCCCCTGCCC TTCGCCTGGG ACATCCTGTC CCCTCAGTTC
GGTTCCCACC GGGGGACGGG AAGCGGACCC TGTAGGACAG GGGAGTCAAG
951 ATGTACGGCT CCAAGGCCTA CGTGAAGCAC CCCGCCGACA TCCCCGACTA
TACATGCCGA GGTTCCGGAT GCACTTCGTG GGGCGGCTGT AGGGGCTGAT
1001 CTTGAAGCTG TCCTTCCCCG AGGGCTTCAA GTGGGAGCGC GTGATGAACT
GAACTTCGAC AGGAAGGGGC TCCCGAAGTT CACCCTCGCG CACTACTTGA
1051 TCGAGGACGG CGGCGTGGTG ACCGTGACCC AGGACTCCTC CCTGCAGGAC
AGCTCCTGCC GCCGCACCAC TGGCACTGGG TCCTGAGGAG GGACGTCCTG
1101 GGCGAGTTCA TCTACAAGGT GAAGCTGCGC GGCACCAACT TCCCCTCCGA
CCGCTCAAGT AGATGTTCCA CTTCGACGCG CCGTGGTTGA AGGGGAGGCT
1151 CGGCCCCGTA ATGCAGAAGA AGACCATGGG CTGGGAGGCC TCCTCCGAGC
GCCGGGGCAT TACGTCTTCT TCTGGTACCC GACCCTCCGG AGGAGGCTCG
1201 GGATGTACCC CGAGGACGGC GCCCTGAAGG GCGAGATCAA GCAGAGGCTG
CCTACATGGG GCTCCTGCCG CGGGACTTCC CGCTCTAGTT CGTCTCCGAC
1251 AAGCTGAAGG ACGGCGGCCA CTACGACGCT GAGGTCAAGA CCACCTACAA
TTCGACTTCC TGCCGCCGGT GATGCTGCGA CTCCAGTTCT GGTGGATGTT
1301 GGCCAAGAAG CCCGTGCAGC TGCCCGGCGC CTACAACGTC AACATCAAGT
CCGGTTCTTC GGGCACGTCG ACGGGCCGCG GATGTTGCAG TTGTAGTTCA
1351 TGGACATCAC CTCCCACAAC GAGGACTACA CCATCGTGGA ACAGTACGAA
ACCTGTAGTG GAGGGTGTTG CTCCTGATGT GGTAGCACCT TGTCATGCTT
1401 CGCGCCGAGG GCCGCCACTC CACCGGCGGC ATGGACGAGC TGTACAAGTA
GCGCGGCTCC CGGCGGTGAG GTGGCCGCCG TACCTGCTCG ACATGTTCAT
ApaI
1451 GGGGCCCGGT ACCTTAATTA ATTAAGGTAC CAGGTAAGTG TACCCAATTC
CCCCGGGCCA TGGAATTAAT TAATTCCATG GTCCATTCAC ATGGGTTAAG
pCMV-C-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-mCherry)
包括:
AclI AfeI AflII AgeI AscI AsiSI BaeI
BcgI BlpI BmgBI BsiWI BsmBI BspEI BspQI
BssHII BstZ17I EarI EcoNI FseI NruI PmeI
PmlI PpuMI PshAI PspXI SapI ScaI SpeI
SwaI XmnI
pCMV-C-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-mCherry once)包括:
NdeI CA`TA,TG 240 |
PflMI CCAN,NNN`NTGG 1177
Bpu10I CC`TNA,GC 1282
BbvCI CC`TCA,GC 1282 |
pCMV-C-mCherry质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′
C-mCherry primer (852-873): 5′CCTCGTAGGGGCGGCCCTCGCC-3′
pCMV-C-mCherry的全序列信息:PHWE4405 pCMV-C-mCherry-seq.txt
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海华潍书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。