产品简介:
Caspase 8 活性检测试剂盒(Caspase 8 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 8酶活性或纯化的caspase 8酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8也称FLICE、MACH或Mch5,有时被写作caspase-8或caspase 8,通常以酶原的形式存在,在细胞凋亡的信号转导过程中被激活。Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体,进一步激活下游的caspase 4,caspase 6,caspase 9和caspase 10。
本Caspase 8活性检测试剂盒是基于caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA(acetyl-Ile-Glu-Thr-Aspp-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 8催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 8酶活性的标准品。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
保存条件:
-20℃保存,Ac-IETD-pNA和pNA需避光保存。
注意事项:
须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405,如有困难可以测定A400。
Ac-IETD-pNA需尽量避免反复冻融,请注意适当分装。
测定蛋白浓度需Bradford蛋白浓度测定试剂盒(PHWQ0013),可向上海华潍订购。建议样品用水稀释1倍后再用Bradford法测定蛋白浓度,以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。
pNA(中文名为4-硝基苯胺)有毒,请注意小心防护。pNA(10mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
本试剂盒的裂解液可以和上海华潍生产的其它caspase活性检测试剂盒的裂解液通用,即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于上海华潍其它caspase活性检测试剂盒的检测。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。