产品简介:
在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份,而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白,不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位,而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究,例如EMSA(也称gel shift),footprinting等。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western,EMSA,footprinting,报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50个样品,如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。
PMSF(PHWTU683)可以向上海华潍订购。
抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
本试剂盒对于组织样品,仅适合于新鲜组织,对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用上海华潍生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒
(PHWQ0016/PHWQ0027/PHWQ0027T/PHWQ0028/PHWQ0029/PHWQ0029T)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。