产品简介:
GSH和GSSG检测试剂盒(GSH and GSSG Assay Kit)是一种简单易行的可以分别检测出GSH(还原型谷胱甘肽)和GSSG(氧化型谷胱甘肽)含量的检测试剂盒。
通过谷胱甘肽还原酶把GSSG还原成GSH,而GSH可以和生色底物DTNB反应产生黄色的TNB和GSSG。适当配制反应体系,前后两个反应合并起来后,总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个颜色产生的限速因素,总谷胱甘肽的量就决定了黄色的TNB形成量。从而通过测定A412就可以计算出总谷胱甘肽的量。用适当试剂先清除样品中的GSH,然后利用上述反应原理就可以测定出GSSG的含量。用总谷胱甘肽(GSSG+GSH)的量扣除GSSG的含量,就可以计算出GSH的含量。
保存条件:
NADPH和GSH清除试剂-20℃保存,其余4℃保存,半年有效。GSSG配制成溶液后,需适当分装,-20℃保存至少3个月有效。DTNB溶解于DMSO后,需适当分装,-20℃保存至少3个月有效。蛋白去除试剂M配制成溶液后仅限当天使用。NADPH溶解后,适当分装,-70℃保存。稀释的GSH清除辅助液和GSH清除试剂溶液均须新鲜配制使用。
注意事项:
本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应,所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。特别是DTT、巯基乙醇等含有巯基的试剂会严重干扰本试剂盒的测定,请尽量避免。
一定要严格控制反应时的温度和反应时间,否则每次都需做标准曲线。
NADPH等试剂不太稳定,要严格按照后续说明操作,谨防失活。
蛋白去除试剂M溶液必须新鲜配制并限当日使用。GSH清除试剂也须新鲜稀释后使用。
蛋白去除试剂M较难溶解,可以通过剧烈votex并适当加热(不超过37℃)以促进溶解。
谷胱甘肽还原酶配制在接近饱和的硫酸铵溶液中,存放一段时间后容易出现硫酸铵结晶,属正常现
象。室温孵育促进晶体溶解后可继续使用。如果有水分蒸发到管壁上,则需先离心,随后再促进晶体溶解。如果出现盖子未盖紧导致水汽泄漏的情况,则需补加蒸发掉的水量,然后再促进晶体溶解。可在晶体溶解后使用,但不溶解晶体直接使用也可以,此时可以使用的酶的总体积会稍稍减小一些。
DMSO在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。